在生物活體內，生物體有自身的免疫系統(tǒng)保護細胞或組織，但是在體外培養(yǎng)時，沒有任何保護自己的免疫屏障。對于二氧化碳培養(yǎng)箱的基本參數溫度、CO2 和濕度，大多數培養(yǎng)箱都能滿足研究實驗的需要。然而，針對培養(yǎng)過程中面臨的各種污染源，各品牌二氧培養(yǎng)箱的控制方式和效果不盡相同，因此細胞體外培養(yǎng)中較為大的威脅實際上是污染問題。
二氧化碳培養(yǎng)箱里的主要污染源：真菌（霉菌和酵母菌）、細菌、病毒、支原體、非同種細胞。 對于細胞來說，非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存，培養(yǎng)箱本身是不會辨別的，而細胞培養(yǎng)中大部分時間里細胞都是位于培養(yǎng)箱內，因此箱體內能否抑菌或滅菌非常關鍵！
1、真菌（霉菌和酵母菌）：真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了；目前沒有好的抑制方法，包括現在常用的兩性霉素，一旦污染容易反復爆發(fā)，尤其孢子很難殺滅。
2、細菌：細菌污染后，培養(yǎng)基1-2天就會變色，對細胞生長影響明顯，應迅速將污染細胞與其它細胞系隔離，滅菌后丟棄，還要用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和*凈臺。
3、病毒：由于病毒寄生生存，爆發(fā)后盡快和正常細胞隔離，丟棄處理，相對來說容易處理，對操作者威脅較大；盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng)，但生產疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
4、支原體：支原體污染后，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實則細胞已經受到多方面潛在影響，如引起細胞變形，影響DNA合成，抑制細胞生長等，往往被大多數實驗者忽視。
5、非同種細胞：即細胞交叉污染，由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開，往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前，普遍上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染，致使許多實驗宣告無效。
因此，以上污染一旦發(fā)生，細胞較為后基本只能丟棄，實驗無法挽救，對于許多取樣困難的實驗損失無法估量！
目前，二氧化碳培養(yǎng)箱的滅菌技術主要有干熱、濕熱、紫外燈照射、消毒劑擦拭等。
高溫干熱空氣滅菌是目前普遍*的較為有效的滅菌技術，能*消滅所有微生物污染源（包括耐高溫的芽孢桿菌）；濕熱滅菌通常用于高壓蒸汽滅菌中，比較少用在CO2培養(yǎng)箱上，濕熱滅菌在常壓下又叫煮沸法，煮沸的水溫一般至少需為100℃，細菌繁殖體煮沸5分鐘被殺死，但芽胞常需煮沸2小時以上才可被殺死；紫外燈照射法的有效性受很多因素影響，如遮擋、時間、強度、照射距離，濕度等，滅菌效果很難保證；消毒劑擦拭法是對表面滅菌的方法，適合于平整的表面如實驗臺面，而箱體內部設計的死角、各種器件因無法擦拭等因素導致滅菌效果也很有限，而且含氯、碘的消毒劑對于不銹鋼有腐蝕作用，不能對不銹鋼箱體進行擦拭滅菌
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