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對于分光光度計(jì)我們應(yīng)用比較廣泛，但是了解甚少，在此為大家介紹一下分光光度計(jì)的有關(guān)知識，希望能夠更好的了解以及應(yīng)用。

分光光度計(jì)原理：是利用分光光度法通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。

分光光度計(jì)主要組成由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。

1.分光光度計(jì)按照波長及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為：可見光分光光度計(jì)，紫外分光光度計(jì)，紅外分光光度計(jì)，熒光分光光度計(jì)，原子吸收分光光度計(jì)。

可見光分光光度計(jì)測定波長范圍為400760 nm的可見光區(qū)
紫外分光光度計(jì)測定波長范圍為200400nm的紫外光區(qū)
紅外分光光度計(jì)測定波長范圍為大于760nm的紅外光區(qū)
熒光分光光度計(jì)用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜
原子吸收分光光度計(jì)光源發(fā)出被測的特征光譜輻射被經(jīng)過原子化器后的樣品蒸氣中的待測元素基態(tài)原子所吸收通過測定特征輻射被吸收的大小來求出被測元素的含量。

不同種類的分光光度計(jì)的基本原理相似都是利用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源通過系列分光裝置從而產(chǎn)生特定波長的光源。光源透過測試的樣品后部分光源被吸收通過測量樣品的吸光值經(jīng)過計(jì)算可以轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。 

2.分光光度計(jì)按自動(dòng)化程度分類可分:為手動(dòng)、半自動(dòng)、自動(dòng)分光光度計(jì)。 

3.分光光度計(jì)按軟件可分為:帶掃描、不帶掃描。

分光光度計(jì)較為常使用的就是紫外可見分光光度計(jì)。

根據(jù)紫外可見分光光度計(jì)的儀器結(jié)構(gòu)可以分為三類：單光束分光光度計(jì)、雙光束分光光度計(jì)和雙波長分光光度計(jì)。

1、單光束分光光度計(jì)

單光束是指從光源今發(fā)出的光，經(jīng)過單色器等—系列光學(xué)元件，通過吸收池，較為后照在檢測器上時(shí)，始終為一束光。它只官一束單色光(光束只能交替通過參比溶液、樣品溶液)，一只比色皿，一只光電轉(zhuǎn)換器。工作時(shí)，一條光路，先通過多比溶液，再通過試樣溶液進(jìn)行光強(qiáng)度的測旦?！　?/span>

單光束分光光度計(jì)的特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡單、價(jià)格低，主要適用于做定量分析，測量結(jié)果受電源的波動(dòng)影響較大，容易給測量結(jié)果帶來較大的誤差。所以，它們在位灼上受到限制。一般來講，要求較高的制藥行業(yè)、質(zhì)量檢驗(yàn)行加等不適宜使用單光束紫外可見分光光度訃。

2、雙光束分光光度計(jì)

雙光束分光光度汁就是有兩束單色光的紫外可見分光光度計(jì)。其光路設(shè)計(jì)基本上與單光束分光光度計(jì)相似。區(qū)別是在單色器與吸收弛之間加了一個(gè)切光器，其作用是以一定的頻率把一個(gè)光束交替分為強(qiáng)度相等的兩柬光，使一路通過參比溶液，另一路通過樣品溶液。然后由檢測器交替接收參比信號和樣品信號。接收的光信號轉(zhuǎn)變成電信號后，由前置放大器放大，并進(jìn)一步解調(diào)、放大、補(bǔ)償?shù)?，較為后由顯示系統(tǒng)顯示。

3.雙波長分光光度計(jì)采用兩個(gè)單色器，可以同時(shí)得到兩柬波長不同的單色光，其光路. 光源發(fā)出的光被兩個(gè)單色器分別分離出波長為4：和4z的單色光，通過切光器，將兩束光以一定的時(shí)間間隔交替照射到裝有樣品試液的同一個(gè)吸收池，由檢測器顯示出試液在波長4?和42的透射比或吸光度。雙波長分光光度計(jì)不僅能測量高濃度試樣、多組分混合試樣，而義測定混濁樣品時(shí)比單波長測定更靈敏、更有選擇性。雙波長測定時(shí)，兩個(gè)波長的光通過同一吸收池，pJ以消除因吸收他的參數(shù)不同、位置不同、污垢以及制備參比溶液等帶來的誤差，從而可以顯著地提高測定的準(zhǔn)確度。

單光束分光光度計(jì)：由一束經(jīng)過單色器的光，輪流通過參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行光強(qiáng)度測量，主要適于做定量分析。

雙光束分光光度計(jì)：以兩束光一束通過樣品、另一束通過參考溶液的方式來分析樣品的分光光度計(jì)。這種方式可以克服光源不穩(wěn)定性、某些雜質(zhì)干擾因素等影響，還可以檢測樣品隨時(shí)間的變化等。 

雙光束分光光度計(jì)操作規(guī)程

1.接通電源，打開雙光束分光光度計(jì)開關(guān)，掀開樣品室暗箱蓋，預(yù)熱10分鐘。

2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時(shí)，需選用較。）

3.根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動(dòng)波長選擇鈕。

4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準(zhǔn)光路。

5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。

6.蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。

7.比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

【應(yīng)用范圍】

可廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、化工、制藥、質(zhì)量檢驗(yàn)、環(huán)境保護(hù)等方面

【注意事項(xiàng)】

為了防止光電管疲勞，不測定時(shí)必須將試樣室蓋打開，使光路切斷，以延長光電管的使用壽命。

取拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光學(xué)表面。

比色皿不能用堿溶液或氧化性強(qiáng)的洗滌液洗滌，也不能用毛刷清洗。

比色皿外壁附著的水或溶液應(yīng)用擦鏡紙或細(xì)而軟的吸水紙吸干，不要擦拭，以免損傷它的光學(xué)表面。

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器，應(yīng)用也是比較廣泛。在此這里介紹的分光光度計(jì)的知識是由上海旦鼎貿(mào)易有限公司整理編輯，如有需要轉(zhuǎn)載敬請說明，謝謝！