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PCR儀的分類(lèi)及應(yīng)用領(lǐng)域
更新時(shí)間:2018-11-15   點(diǎn)擊次數(shù):3324次

普通的PCR

把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀,叫傳統(tǒng)的PCR儀,也叫普通PCR儀。

它是由主機(jī),加熱模塊,PCR管,熱蓋,控制軟件組成。根據(jù)DNA的片段高溫解鏈,降溫配對(duì)聚合原理,通過(guò)循環(huán)改變加熱模塊的溫度,微量不易于分辨的的DNA的片段進(jìn)行擴(kuò)增成大量的DNA的片段,從而對(duì)其進(jìn)行分析鑒定。根據(jù)需要可結(jié)合電泳儀,水平電泳槽,一起應(yīng)用。如果要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行。主要是做簡(jiǎn)單的,對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。

該儀器主要應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn),食品檢測(cè),科研機(jī)構(gòu),高等院校教學(xué)對(duì)遺傳變異,基因表達(dá)等進(jìn)行研究。

 

梯度PCR

把一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常12鐘溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。

工作模式和原理同普通PCR儀一樣,它出了又普通PCR儀的功能外還多了一個(gè)梯度退火功能。DNA的片段的擴(kuò)增對(duì)溫度的控制精度要求特別高,不同的DNA的片段其退火溫度不一樣,通過(guò)計(jì)算DNA的片段中的CG堿基的含量只能初步的判斷出較為優(yōu)退火溫度在+5范圍內(nèi),如果用普通PCR儀進(jìn)行研究,需重復(fù)擴(kuò)增很多次,然后做電泳進(jìn)行分析來(lái)確定較為優(yōu)退火溫度。而梯度PCR儀則只需要一次就可以完成,在節(jié)省了時(shí)間的同時(shí)提高了實(shí)驗(yàn)的可靠性和準(zhǔn)確性。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣節(jié)約成本的同時(shí)也節(jié)約了時(shí)間和經(jīng)費(fèi)。在不設(shè)置梯度的情況下,梯度PCR儀也可以做普通PCR擴(kuò)增。

該儀器主要應(yīng)用于科研,教學(xué)機(jī)構(gòu),醫(yī)學(xué)臨床研究,高等院校,病毒分析,疾控中心等。

 

原位PCR

它是由主機(jī),加熱模塊,玻片,熱蓋,控制軟件組成。主要是應(yīng)用對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的DNA的片段進(jìn)行原位擴(kuò)增分析-即定位分析,如病源基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等。是保持細(xì)胞或組織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞的靶DNA所在的位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增,不但可以檢測(cè)到靶DNA,又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置,于分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過(guò)程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實(shí)用價(jià)值。它無(wú)需將細(xì)胞破碎提取DNA,細(xì)胞內(nèi)有DNA酶的作用擴(kuò)增受到一定的影響,使用不是很普遍。

該儀器主要應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床研究,如癌細(xì)胞等。

 

實(shí)時(shí)熒光定量PCR

在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR儀。

PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。把這PCR儀叫做實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。熒光定量PCR儀有單通道,雙通道,和多通道。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候,選用單通道,有多熒光標(biāo)記的時(shí)候用多通道。單通道也可以檢測(cè)多熒光的標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物,因?yàn)橐淮沃荒軝z測(cè)一種目的基因的擴(kuò)增量,需多次擴(kuò)增才能檢測(cè)完不同的目的基因片段的量。多色多通道檢測(cè)是當(dāng)今的主流趨勢(shì)--儀器的激發(fā)通道越多,儀器適用的熒光素種類(lèi)越多,儀器適用范圍就越寬;多通道指可同時(shí)檢測(cè)一個(gè)樣品中的多種熒光,儀器就可以同時(shí)檢測(cè)單管內(nèi)多模版或者內(nèi)標(biāo)+樣品,通道越多,儀器適用范圍越寬、性能就更強(qiáng)大,價(jià)格也較為為昂貴。

該儀器主要應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床檢測(cè),生物醫(yī)藥研發(fā),食品行業(yè),科研院校等機(jī)構(gòu)。如動(dòng)物疾病檢測(cè):禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門(mén)菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲(chóng)病等、炭疽芽孢桿菌。食品安全:食源微生物、食品過(guò)敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測(cè)??茖W(xué)研究:醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究、大學(xué)及研究所等。

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